بافر سدیم سیترات: آموزش جامع تهیه بافر محافظ RNA و آشکارساز آنتی‌ژن
مقدمه
بافر سدیم سیترات یک محلول حیاتی در تحقیقات ژنتیکی و بافتی است. این بافر به دلیل توانایی در حفاظت از RNA و تسهیل در تشخیص آنتی‌ژن‌ها، کاربردهای گسترده‌ای دارد.
کاربردهای کلیدی بافر سدیم سیترات:
- حفاظت از RNA: بافر سدیم سیترات با کاهش هیدرولیز RNA، به حفظ ساختار و عملکرد آن در فرایندهای جداسازی و خالص‌سازی mRNA کمک می‌کند. این ویژگی آن را به ابزاری ارزشمند در مطالعات رونویسی تبدیل کرده است.
- تشخیص آنتی‌ژن‌ها: در آماده‌سازی بافت‌های تثبیت‌شده، بافر سدیم سیترات با شکستن اتصالات عرضی بین آنتی‌ژن‌ها و مواد تثبیت‌کننده، به آشکارسازی بهتر آنتی‌ژن‌ها کمک می‌کند.
در ادامه، با روشی ساده و سریع (کمتر از 10 دقیقه) برای تهیه بافر سدیم سیترات با pH 6 (اسیدی) آشنا خواهید شد.
مواد و تجهیزات مورد نیاز برای تهیه بافر سدیم سیترات
تهیه بافر سدیم سیترات به مواد و تجهیزات ساده‌ای نیاز دارد. لیست زیر شامل ضروری‌ترین‌ها است:
- اسید سیتریک
- سدیم هیدروکسید 1 مولار (NaOH)
- آب مقطر
- pH متر کالیبره شده
- (اختیاری) سدیم سیترات
تجهیزات آزمایشگاهی:
- استوانه مدرج 1 لیتری
- بالن حجمی 1 لیتری
- سه عدد بطری آزمایشگاهی 1 لیتری
- مگنت استایرر (همزن مغناطیسی)
- میله همزن مغناطیسی
این مواد و تجهیزات را می‌توانید در آزمایشگاه‌های مدارس، محل کار یا از طریق فروشگاه‌های آنلاین و عرضه‌کنندگان مواد و تجهیزات آزمایشگاهی تهیه کنید.
دو روش برای تهیه بافر سدیم سیترات
بسته به مواد اولیه‌ای که در دسترس دارید، می‌توانید از یکی از دو روش زیر برای تهیه بافر سدیم سیترات استفاده کنید:
- روش اول (در صورت دسترسی به اسید سیتریک و باز مزدوج آن):
- محلول استوک اسید سیتریک: 21 گرم اسید سیتریک را در 1 لیتر آب مقطر حل کنید.
- محلول استوک سدیم سیترات: 29.4 گرم سدیم سیترات را در 1 لیتر آب مقطر حل کنید.
- روش دوم (در صورت دسترسی فقط به اسید سیتریک):
- 2.1 گرم اسید سیتریک را در مقداری آب مقطر (تقریباً 1 لیتر) حل کنید. توجه داشته باشید که حجم نهایی هنوز به 1 لیتر نرسیده باشد.
مخلوط کردن محلول‌های اسید سیتریک و سدیم سیترات
82 میلی‌لیتر از محلول اسید سیتریک (تهیه شده در مرحله قبل) را با 18 میلی‌لیتر از محلول سدیم سیترات (تهیه شده در مرحله قبل) مخلوط کنید. سپس، آنقدر آب مقطر به این مخلوط اضافه کنید تا حجم نهایی تقریباً به 1 لیتر برسد (هنوز نباید دقیقاً 1 لیتر شود).
تنظیم pH بافر سدیم سیترات
محلول را به آرامی با استفاده از همزن مغناطیسی هم بزنید. در حین هم زدن، با استفاده از سدیم هیدروکسید 1 مولار (NaOH)، pH محلول را به 6.0 برسانید. پس از تنظیم pH، با استفاده از بالن حجمی، آب مقطر بیشتری اضافه کنید تا حجم نهایی محلول دقیقاً به 1 لیتر برسد.
- شیمی
- علم
